蛋白质多肽酶解及分离新技术的改进

目的 探讨新型蛋白质多肽酶解和分离技术,以此提高蛋白质的质谱鉴定水平,使其适用于更复杂生物样品,从而弥补传统蛋白质组学利用的二维电泳-质谱技术所产生的不足.方法 利用美国promega和自主修饰Self-owned胰蛋白酶,酶解浓度不同的牛血清清蛋白测定总离子流图(TIC)并通过Proteome Discov-erer软件进行数据分析,测定牛血清清蛋白覆盖率.利用Self-owned胰蛋白酶酶解牛血清清蛋白,其中酶切液用自制的二维一体毛细管色谱柱进行分离,通过高效液相色谱与质谱技术平台,通过对TIC、信号强度和保留时间(RT),观察毛细管色谱柱分离性能和重复性.结果 美国promega和Self-owned胰蛋白酶酶解浓度不同的牛血清清蛋白结果显示,Self-owned胰蛋白酶在高效液相色谱与质谱技术鉴定高 、中 、低浓度牛血清清蛋白覆盖率分别为38.22％ 、28.34％ 、13.18％;而美国promega胰蛋白酶酶解牛血清清蛋白覆盖率分别为34.93％ 、26.36％ 、10.21％.Self-owned胰蛋白酶和自制的二维一体毛细管色谱柱联用,用于牛血清清蛋白分析,通过质谱分析,结果显示,在极低浓度条件下,牛血清清蛋白的覆盖率是24.22％.在相同的实验条件下重复进行两次实验,观察自制的二维一体毛细管色谱柱的重复性,结果显示选用牛血清清蛋白酶切的肽段混合物中质荷比(m/z)740.4为强度较高的特征肽段,两次的RT是51.90、51.95 min,信号强度是6.77×105、7.42×105.结论 Self-owned胰蛋白酶拥有高催化活性,自制的二维一体毛细管色谱柱具有较高的分离性能和重复性,将两者联合应用于蛋白质组学技术中,可以显著增高蛋白质数量的检出率.