HIV-1假病毒包装及感染条件优化

目的 对人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)假病毒包装及感染条件进行优化,获得高重复性、高稳定性和高滴度的假病毒包装方法和较高的感染效率.方法 采用pSG3△env质粒与pcDNA3.1-SF162 rev/env质粒共转染 293T细胞包装病毒,对HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例、转染试剂与质粒比例、假病毒收获时间对HIV假病毒包装滴度的影响进行实验,同时对感染过程中假病毒接种剂量与二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-Dextran) 使用浓度进行了优化.结果 在包装过程中当HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例为4∶1、转染试剂与质粒比例为3∶1,转染后培养48 h HIV-1假病毒的滴度最高;在假病毒感染过程中,15 μg/mL的DEAE-Dextran可有效增加假病毒的感染效率且不会对细胞造成较大毒性.结论 通过对包装和感染过程中关键条件的优化,可以有效提高HIV-1假病毒的包装和感染效率,增加实验技术稳定性,为新型抗艾滋病药物筛选和艾滋病疫苗评价等研究奠定了基础.