实时荧光定量PCR法用于人类SLC01B1和ApoE基因多态性检测的方法学评价

目的：探讨在ISO15189实验室认可体系下，实时荧光定量 PCR法检测人类SLC01B1和ApoE基因多态性的方法学评价。方法本文收集经Sanger测序确定基因型的20份DNA样本。采用实时荧光定量PCR法对其中2份样本的SLCO1B1*1b、SLCO1B1*5、ApoE2和ApoE4共4个多态性位点分别批内重复扩增检测10次，以评价方法的精密度；再使用该方法扩增所有样本的4个多态性位点，每个位点检测一次，并与Sanger测序法结果比对，以评价方法的准确性；使用实时荧光定量PCR法对其中1份经梯度稀释的DNA样本进行扩增，以评价方法的最低检测限。结果2份DNA样本扩增所得Ct值变异系数均小于2．5％（≤1％）；与Sanger测序法结果对比，实时荧光定PCR法结果准确性达100％（20／20）；DNA浓度在0．964 ng／μl时，该方法仍可正确检出其基因型。结论借助经典实时荧光定量PCR法，我们能准确、快速地检测临床样本SLC01B1和ApoE基因多态性，用于指导正确合理使用他汀类药物。