三七对脓毒症急性肾损伤大鼠肾组织Toll样受体2/4和NOD样受体P1/3表达的干预作用

目的 探讨Toll样受体/NOD样受体(TLRs/NLRs)在脓毒症急性肾损伤(AKI)大鼠中的表达及三七的干预作用.方法 选择150只雄性SD大鼠,将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、三七预处理组,每组50只.采用盲肠结扎穿刺术(CLP)复制脓毒症大鼠AKI模型;假手术组只开腹不结扎.三七预处理组预先给予三七3 g/kg灌胃、连续3 d,假手术组、脓毒症模型组给予等量生理盐水灌胃.各组大鼠于制模后6、12、24 h取10只采血后处死,并留取肾脏标本.采用鲎试剂检测内毒素水平;采用全自动生化分析仪检测血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL-1β、IL-18、IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肾组织NLRP1/3、TLR2/4的mRNA及蛋白表达水平;光镜观察术后24 h肾组织病理学改变;每组剩余20只大鼠观察4 d、7 d存活率.结果 脓毒症模型组和三七预处理组内毒素、SCr、BUN、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α、NLRP3和TLR2/4的mRNA及蛋白表达水平均较假手术组明显升高,内毒素、IL-18、NLRP3、TLR2/4的mRNA及蛋白表达水平均于术后6 h即出现统计学差异〔内毒素(kU/L):61.3±25.7、56.9±18.6比0.2±0.1,IL-18(ng/L):16.7±5.0、13.8±2.9比10.6±2.8,NLRP3 mRNA(2-ΔΔCt):6.3±1.9、4.0±1.2比 1.1±0.4,TLR2 mRNA(2-ΔΔCt):5.7±1.3、2.0±0.8 比 0.9±0.3,TLR4 mRNA(2-ΔΔCt):4.4±1.2、2.3±0.7比 0.6±0.2, NLRP3/β-actin :38.2±9.3、26.1±7.2 比 18.3±5.1,TLR2/β-actin :21.9±6.1、16.2±4.4 比10.9±2.8,TLR4/β-actin :18.3±6.7、12.0±3.9比7.5±2.0,均P＜0.05〕,SCr、BUN、IL-1β、TNF-α、IL-6均于术后12 h出现统计学差异〔SCr(μmol/L):62.3±21.6、38.1±13.9比36.0±11.9,BUN(mmol/L):16.5±7.2、6.9±2.6 比 6.8±2.5,IL-1β(ng/L):37.6±10.9、31.2±9.3 比20.3±6.5,TNF-α(ng/L):15.6±3.9、10.2±2.8比7.3±2.1,IL-6(ng/L):9.3±2.5、6.8±1.7比5.0±1.3,均P＜0.05〕,NLRP1的mRNA及蛋白表达水平均明显低于假手术组,并于术后6 h即出现统计学差异〔NLRP1 mRNA(2-ΔΔCt): 0.5±0.1、0.8±0.2比1.6±0.5, NLRP1/β-actin :8.0±2.1、16.8±5.0比35.6±10.5,均P＜0.05〕,且三七预处理组上述指标的改变幅度明显小于脓毒症模型组(均P＜0.05);脓毒症模型组4 d和7 d存活率均较假手术组明显下降〔4 d :25%(5/20)比95%(19/20),7 d :15%(3/20)比95%(19/20),均P＜0.05〕,而三七预处理组较脓毒症模型组明显增高〔4 d :65%(13/20)比25%(5/20),60%(12/20)比15%(3/20),均P＜0.05〕.结论 TLR2/4、NLRP1/3可能参与了脓毒症AKI的发病.中药三七可能通过调节TLR2/4、NLRP1/3的表达减轻炎症反应,从而减轻脓毒症AKI大鼠肾脏损伤,改善肾脏功能.