miR-20a-3p靶向STAT3调控大鼠脊髓损伤轴突修复

目的 探索Wistar大鼠脊髓损伤后损伤局部微环境发生改变的分子生物学机制,寻找起关键调控作用的微RNA.方法 15只雌性Wistar大鼠随机分为对照组(n=3)和脊髓损伤组(n=12).脊髓损伤组根据取材时间分为4 h、3 d、7 d、14 d四个组,每组3只.使用Microarray 3.0芯片检测脊髓损伤大鼠损伤局部发生改变的微RNA,运用生物信息学方法论证发挥关键调控作用的微RNA,进行靶基因预测.运用逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-20a-3p表达.采用Western blotting技术检测信号传导子和转录激活子(STAT)3表达量,并分析各组中靶蛋白与目标微RNA表达变化趋势相关性.在神经元中抑制关键候选微RNA,并使用免疫荧光观察靶蛋白表达与轴突生长的关系.结果 脊髓损伤标本中miR-20a-3p特征性上调明显.生物信息分析结果显示,STAT3可为miR-20a-3p的靶基因,与其趋势相反.细胞实验结果显示,miR-20a-3p抑制组与对照组相比轴突延长.Western blotting结果显示,与对照组相比,miR-20a-3p抑制组STAT3蛋白表达显著上调.结论 脊髓损伤后miR-20a-3p通过调节其序列互补靶基因STAT3表达量来影响神经元轴突的生长.miR-20a-3p上调导致STAT3下调,抑制miR-20a-3p,可促进神经元轴突的再生.