siRNA干扰技术沉默p66SHC对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的 探讨干扰p66shc基因表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、迁移的影响.方法 实验分为对照组(不做任何处理)、NC-siRNA组和p66SHC-siRNA组,NC-siRNA组、p66SHC-siRNA组通过Lipofectamine 2000将特异性siRNA转染入结直肠癌HCT116细胞中.荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中p66SHC的表达量;四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell法观察细胞迁移、侵袭的变化;Western Blot检测细胞EMT相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)的水平.结果 采用siRNA干扰HCT116细胞中p66SHC蛋白的表达后,细胞的增殖能力显著下降(P＜0.05),明显抑制细胞侵袭、迁移能力(P＜0.05),E-cadherin蛋白的水平明显上调(P＜0.05),Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平显著下调(P＜0.05).结论 干扰p66SHC基因的表达能阻碍EMT的发生,从而降低结直肠癌细胞的增殖、侵袭以及迁移能力.