HMGB1及其受体RAGE分子信号通路参与调节肝细胞肝癌增殖和侵袭迁移机制的研究

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及其受体晚期糖基化终产物(RAGE)在人体肝细胞癌(HCC)组织中的表达情况,了解HMGB1及其受体RAGE对HCC细胞增殖和侵袭转移的影响,研究HMGB1及其受体分子信号通路参与调节HCC细胞增殖和侵袭转移的相关机制.方法 选取10例人体HCC组织标本和HCC细胞培养标本,以正常的肝脏组织细胞作为对照.通过免疫荧光染色、Western blot、RT-PCR检查方法分析HMGB1对HCC细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、蛋白激酶B(AKT)、NT-κB等信号通路的调节,检测HCC细胞中HMGB1及其受体分子RAGE蛋白的表达量,对HMGB1及其受体RAGE的表达量与其临床症状作相关性分析.结果 ①在HMGB1抑制剂甘草皂甙、重组HMGB1(rHMGB1)、rHMGB1+ sRAGE的作用下,能够有效干扰HMGB1在HCC细胞中的表达.干扰HMGB1可以抑制HCC细胞的增殖、促使细胞凋亡、引起细胞周期阻滞,同时降低其体外迁移和侵袭能力.这些结果提示HMGB1在HCC中具有促增殖、促迁移、抗凋亡和侵袭的作用.②HMGB1能增强MAPKs和NF-κB信号通路活性.稳定干扰HMGB1的HCCLM3细胞内MAPKs的磷酸化水平降低,包括p38和JNK,同时它们的上游激酶(MEK1/2、SEK1)和下游底物(c-Jun、-Myc)的磷酸化也被抑制;NF-κB的表达量及Ser536位点的磷酸化水平也下调.结论 ①HMGB1与RAGE结合通过激活MAPK信号通路最终导致核转录因子NF-κB激活并促进RAGE基因转录,增加RAGE的mRNA含量,使RAGE表达上调,正反馈的扩大HMGB1引起的反应;②HMGB1通过作用于RAGE激活下游RAC1分子,并最终引起VEGF表达上调,进而促进HCC的增殖和侵袭转移.