儿童耐氨苄西林流感嗜血杆菌耐药机制及同源性研究

目的 探讨儿童耐氨苄西林流感嗜血杆菌(Hi)的耐药机制及同源性.方法 收集Hi临床分离株117株.采用微量肉汤稀释法测定菌株耐药情况;采用硝酸噻吩试纸法测定氨苄西林耐药菌株β-内酰胺酶;采用聚合酶链反应(PCR)扩增产β-内酰胺酶氨苄西林耐药(BLPAR)菌TEM-1和ROB-1基因;采用PCR扩增耐药菌株ftsI基因,并对ftsI基因进行测序,通过与Hi RdKW20标准菌株的ftsI基因进行Blast比对确定其氨基酸置换形式,明确ftsI基因突变介导的不产β-内酰胺酶氨苄西林耐药(BLNAR)菌耐药机制;采用多重PCR测定Hi同源性,明确其分子流行病特点.结果 117株Hi中氨苄西林耐药率为56.4％(66/117),β-内酰胺酶检出率为46.2％(54/117),产酶基因均为TEM-1基因.BLNAR菌检出率为10.3％(12/117),ftsI基因一代测序BLPAR菌、BLNAR菌突变率分别为68.5％(37/54)、75.0％(9/12),ftsI基因型Ⅲ型分别为73.0％(27/37)、77.8％(7/9),BLPAR菌与BLNAR菌发生Asn526Lys置换合并Ser385Thr置换分别占51.4％(19/37)、77.8％(7/9);BLPAR菌多重PCR分型分为a、b、c、d和e型,BLNAR菌多重PCR分型分为a、e型,2种菌均具有克隆传播趋势,a型分别占63.0％(34/54)、75％(9/12).结论 耐氨苄西林Hi的耐药机制以产TEM-1型β-内酰胺酶为主,不产酶菌株的耐药机制主要是由KTG基序附近发生Asn526Lys置换合并SSN基序附近发生Ser385Thr置换介导ftsI基因突变所致.BLPAR菌与BLNAR菌ftsI基因型均以Ⅲ型为主,且均具有克隆传播趋势.