高浓度HBsAg检测化学发光微粒子免疫分析法的建立及性能评价

目的 建立定量检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的化学发光微粒子免疫分析法(CMIA),并进行性能评价.方法 将小鼠特异性抗HBsAg抗体包被在磁微粒表面,结合相应HBsAg,加入吖啶酯标记的特异性抗HBsAg抗体,在磁微粒表面形成双抗体夹心免疫复合物,加入预激发液和激发液,激发复合物上的吖啶酯发出光子,光信号值与HBsAg浓度呈正比.筛选最佳反应条件,对自建CMIA检测HBsAg的性能(线性范围、检测限、精密度、干扰试验、交叉反应、稳定性及与电化学发光法的相关性和一致性)进行评价.结果 磁微粒最适浓度为0.4 mg/mL,吖啶酯标记抗体的最适稀释比例为1:200(浓度为250 ng/mL).反应稀释液用量、最适加样量、试剂用量分别为100、20、50μL.自建CMIA检测HBsAg的线性范围为20～100000 IU/mL,最低检测限为9.9 IU/mL,批内和批间变异系数(CV)均<10.0％.血红蛋白<400 mg/L、胆红素<4 mg/L、类风湿因子<800 IU/mL、三酰甘油<2 mg/L、柠檬酸钠<22 mmol/L、乙二胺四乙酸(EDTA)<8 mmol/L对自建CMIA检测HBsAg无干扰.甲型肝炎病毒(HAV)、丙型肝炎病毒(HCV)、戊型肝炎病毒(HEV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)、巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)阳性样本对自检CMIA未发生交叉反应.配制好的试剂在37℃可稳定6 d,开盖后上机(2～8℃)保存可稳定4周,2～8℃密封保存可稳定6个月.自建CMIA与电化学发光法的相关性(r=0.978,P<0.001)和一致性均良好.结论 自建CMIA检测HBsAg的线性范围较宽,高浓度样本可直接检测,无需稀释,且检测性能优良,有较好的临床应用前景.