微小脲原体相对定量方法的建立及临床应用

目的：建立微小脲原体（ Up）聚合酶链反应（ PCR）相对定量方法，克服阴道标本采样差异对检测结果的影响，并探讨Up在细菌性阴道病（ BV）中的作用。方法根据Up 4个血清型拓扑异构酶Ⅳ基因序列，合成Up定量PCR的引物和探针，建立Up PCR定量方法；同时进行宿主细胞甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ GAPDH）基因定量，计算103宿主细胞中Up的相对含量；分别检测Up标准株和临床分离株、解脲脲原体标准株和临床分离株、11种其它阴道常见微生物，验证PCR的特异性；从532例BV患者和276名健康女性采集阴道分泌物，进行Up相对定量分析。结果 Up定量PCR方法能直接检测阴道分泌物中的Up，对解脲脲原体和11种其它阴道常见微生物无交叉反应，灵敏度为100拷贝／μL。 BV患者和健康女性的Up感染率分别为49．8％（265／532）和43．1％（119／276），二者之间差异无统计学意义（χ2＝3．263，P＝0．071）；BV患者和健康女性Up相对定量分别为667拷贝／103细胞和20拷贝／103细胞，二者比较差异有统计学意义（χ2＝47．012，P＝0．0001）。如果以50拷贝／103细胞作为参考值，则BV患者Up的阳性率为39．3％（209／532），健康女性的阳性率为17．0％（47／276），二者比较差异有统计学意义（χ2＝41．537，P＝0．001）。结论 Up黏附到宿主细胞表面是其致病的关键因素。建立的Up相对定量方法能反映宿主细胞上Up的含量，克服了采样差异对检测结果的影响，能更客观地反映Up的致病能力。