转化生长因子-β3对兔牙髓干细胞增殖及骨向分化的影响

目的 探讨转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)对体外培养的兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)增殖和分化的影响.方法 采用酶解组织块法将兔DPSCs分离培养获得DPSCs,光镜下行形态学观察;将体外培养的第3代DPSCs分为5组,分别为对照组、20 μg/L TGF-β3组、40 μg/L TGF-β3组、80 μg/L TGF-β3组和100 μg/L TGF-β3组,分别加入0、20、40、80、100μg/L TGF-β3;采用MTT法检测5组DPSCs A490值,采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物骨钙素(osteocalcin,OC)、Ⅰ型胶原酶(collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)表达情况,采用茜素红染色检测出现矿化结节情况,并进行比较.结果 兔DPSCs呈集落状生长,在体外有一定克隆形成能力;对照组及20、40、80、100 μg/L TGF-β3组兔DPSCs A490值分别为0.34±0.55、0.34±0.19、0.33±0.47、0.33±0.30、0.34±0.47,各组间两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05);80、100 μg/L TGF-β3组诱导后第3天出现Col-Ⅰ阳性表达,第7天开始消失,第5～7天出现BSP阳性表达,第7～14天出现OC阳性表达,第7天出现矿化结节;40 μg/L TGF-β3组第5～7天均有Col-Ⅰ阳性表达,第7天出现BSP阳性表达,第14天出现OC阳性表达,第14天出现矿化结节;20 μg/L组第7天出现Col-Ⅰ阳性表达,第14天消失,第14天出现BSP阳性表达,第21天出现OC阳性表达,第21天出现矿化结节;对照组Col-Ⅰ、BSP和OC均为阴性,未出现矿化结节.结论 TGF-β3对体外培养的兔DPSCs增殖无影响,但对兔DPSCs向成骨细胞分化能力有一定促进作用,并在一定范围内呈浓度依赖关系.