E2F1对食管癌细胞株ECA109生物学功能的影响及机制

目的 探讨E2F1对食管癌细胞株生物学功能的影响及其调控机制.方法 食管癌细胞株ECA109分为ECA109阴性对照组(对照组)、ECA109空载体组(空载体组)和ECA109-E2F1过表达组(过表达组).对照组仅行电转染不加入质粒载体,空载体组电转染不携带E2F1基因的质粒载体,过表达组电转染E2F1过表达质粒载体.质粒转染48 h后,3组采用荧光倒置显微镜观察绿色荧光的表达情况,采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况,采用PCR检测转录因子E2F1、KB抑制蛋白激酶(Ⅰ kappa B kinase,IKK)、IKKβ、核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)和survivinmRNA表达情况,采用Western blot法检测E2F1、IKKα、IKKβ、NF-κB、survivin蛋白表达情况.结果 过表达组绿色荧光蛋白表现为针尖状,呈强阳性表达,空载体组绿色荧光蛋白表达呈阳性,对照组未见绿色荧光蛋白表达;转染48 h后,过表达组G1期细胞比例与空载体组和对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);过表达组G2期细胞比例[(9.30±4.45)％]和早期凋亡率[(16.50±3.21)％]明显低于空载体组[(18.16±1.25)％、(31.70±5.56)％]和对照组[(17.60±4.42)％、(31.46±2.73)％](P＜0.05),S期细胞比例[(35.66±2.99)％]明显高于空载体组[(28.86±1.80)％]和对照组[(29.83±1.84)％](P＜0.05);空载体组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);转染48 h后,过表达组E2F1 mRNA(1.79±0.18)和蛋白(0.535±0.003)、IKKβ mRNA(0.20±0.06)和蛋白(0.394±0.044)、NF-κB mRNA(4.64±0.55)和蛋白(0.043±0.001)、survivin mRNA(2.98±0.20)和蛋白(0.039±0.001)表达水平明显高于对照组[E2F1 mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.009)、IKKp mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.021)、NF-κB mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.014±0.002)、survivin mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.027±0.003)]和空载体组[E2F1 mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.212±0.020)、IKKp mRNA和蛋白(0.99±0.05、0.188±0.018)、NF-κB mRNA和蛋白(0.99±0.03、0.019±0.001)、survivin mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.025±0.002)] (P＜0.05),IKKα mRNA(0.60±0.14)和蛋白(0.614±0.050)表达水平低于对照组(1.00±0.00、0.817±0.055)和空载体组(0.96±0.02、0.733±0.036);对照组与空载体组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ECA109细胞株中E2F1与survivin存在表达调控关系,E2F1对survivin的表达调控通过激活NF-κB的经典激活通路,导致了survivin的转录激活.