微小RNA-320检测在体外循环所致急性呼吸窘迫综合征中的临床价值及其机制研究

目的 研究微小RNA(microRNA)在体外循环(CPB)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者中表达,并初步探讨其机制.方法 设定体外循环转流开始前(T1)、转流结束后4 h (T2)、术后8 h(T3)、术后16 h(T4)等4个时间点,采用microRNA微阵列芯片分析32例因CPB诱发ARDS患者microRNA变化,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术加以验证.酶联免疫分析法检测患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)在T1~T4等4个时间点的水平变化,同时计算呼吸指数和氧合指数.Pearson相关性分析研究microRNA-320(miR-320)与TNF-α、IL-6、呼吸指数、氧合指数、Murray急性肺损伤评分以及急性病生理学和长期健康评价(APACHE)Ⅱ评分的相关性.体外培养人肺腺癌A549细胞,并转染pcDNA3.1-miR-320,采用细胞增殖检测试剂盒8(CCK-8)法和流式细胞术分析pcDNA3.1-miR-320转染对A549细胞48 h存活和凋亡率的影响.结果 在T1与T4时间点,ARDS患者血液标本中共有8个microRNA表达差异有统计学意义(t=28.313、30.014、25.313、20.312、29.442、21.443、18.427、22.369,P均<0.001),其中5个出现降低,3个出现增高,其中miR-499的降低程度(0.28 ± 0.09)最为显著,而miR-320的增高程度(1.62 ± 0.12)最为显著(P均<0.05).qRT-PCR证实从T1至T4时间点,miR-320相对表达水平(1.00、1.14 ± 0.07、1.34 ± 0.06、1.71 ± 0.08)逐渐升高,差异有统计学意义(F=20.648,P<0.05).CPB诱发ARDS的患者T1与T4时间点相比,TNF-α[(110 ± 10)ng/L vs.(254 ± 16)ng/L]、IL-6[(86 ± 8)ng/L vs.(165 ± 11)ng/L]、呼吸指数[(0.182 ± 0.021)vs.(0.381 ± 0.032)]均增高,氧合指数[(350 ± 22)vs.(245 ± 18)]下降,差异均有统计学意义(P均<0.05).Pearson相关性分析发现,miR-320的表达水平与Murray急性肺损伤评分,APACHEⅡ评分,T4时间点TNF-α、IL-6、呼吸指数均呈正相关(r = 0.685、0.744、0.737、0.711、0.846,P 均 < 0.05),而与氧合指数呈负相关(r =-0.745, P<0.05).pcDNA3.1-miR-320转染的A549细胞组与对照组48 h细胞存活率 [(82% ± 8%)vs. 100%]、凋亡率[(20.0% ± 1.1%)vs.(9.4% ± 0.8%)]相比,差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论 miR-320水平与TNF-α、IL-6等肺部损伤指标具有相关性,miR-320的高表达可能介导CPB导致的ARDS,作用机制为诱导肺泡上皮细胞的凋亡,因此miR-320具有临床诊断、评估ARDS生物学指标的潜能.