建立体外诱导和检测中性粒细胞胞外诱捕网的方法

目的：建立体外诱导和检测中性粒细胞胞外诱捕网的方法，旨在研究中性粒细胞胞外诱捕网（NET）产生和调节的机制。方法分离正常人外周血中性粒细胞，通过内毒素（LPS）和白细胞介素-8（IL-8）体外诱导NET产生。采用免疫荧光染色和激光共聚焦显微成像定性评价NET生成；采用PicoGreen?染料定量检测细胞上清游离DNA，反映NET生成量。结果 LPS体外刺激中性粒细胞3 h后，与对照组相比，产生大量胞外网状结构（NET），该结构包含DNA、组蛋白和髓过氧化物酶（MPO）成分；同时细胞上清中游离DNA（NET）含量显著升高（P＜0.01）。采用IL-8体外刺激中性粒细胞3 h，与上述结果相似（P＜0.05）。结论建立了体外诱导和定性、定量检测NET的方法，二者结合能更好地评价NET的产生。