SAS诱导氧化应激时人卵巢癌顺铂敏感细胞与耐药细胞死亡方式的差异

目的 利用柳氮磺吡啶(Sulfalsalazine,SAS)诱导氧化应激,探讨卵巢癌非耐药细胞与耐药细胞死亡方式的差异.方法 选用人卵巢癌顺铂敏感细胞SKOV3和顺铂耐药细胞SKOV3/DDP,实验分组为对照组(Con),SAS各剂量组.应用铁死亡抑制剂Fer-1,实验分组为对照组,SAS组,Fer-1组,Fer-1与SAS联合作用组.应用程序性坏死抑制剂Nec-1,实验分组为对照组,SAS组,Nec 1组,Nec-1与SAS联合作用组.MTT法检测细胞生存率,实时无标记细胞功能分析法(Real time cell analysis,RTCA)实时连续分析细胞生存率.结果 在SAS诱导卵巢癌细胞死亡过程中,耐药与非耐药卵巢癌细胞对SAS的敏感性不同,与非耐药细胞比较,耐药细胞对SAS更耐受.应用铁死亡抑制剂Fer-1,MTT、RTCA法结果显示,与SAS组比较,SAS与Fer-1联合作用组,SKOV3细胞生存率没有变化(P＞0.05);Fer-1与SAS联合作用仅在24 h前,SKOV3/DDP细胞生存率增加(P＜0.05),其生存率曲线高于SAS组.应用程序性坏死(necroplosis)抑制剂Nec-1,RTCA结果显示,Nec-1与SAS联合作用持续至36 h SKOV3细胞生存率曲线低于SAS作用组的生存率曲线(P＞0.05);而Nec-1与SAS联合作用SKOV3/DDP细胞生存率曲线高于SAS作用组的生存率曲线(P＜0.05).Western blotting结果显示与SAS作用0h比较,SAS作用不同时间点,SKOV3细胞磷酸化MLKL蛋白表达没有变化(P＞0.05),而SKOV3/DDP细胞中SAS作用12 h、24 h时磷酸化MLKL蛋白表达增强(P＜0.05).结论 两种细胞对SAS的敏感性不同,可能与敏感细胞和耐药细胞在SAS作用时发生的细胞死亡途径差异有关.耐药细胞在氧化应激持续不同时间时发生程序性坏死和铁死亡途径.