BAS-TRFIA 法检测抗环瓜氨酸肽抗体方法学的建立

目的：利用生物素-链霉亲和素放大系统建立一种可快速、灵敏地定量检测患者血清中抗环瓜氨酸肽（anti-cyclic citrullinated peptide，CCP）抗体的时间分辨荧光免疫分析法（time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）。方法将链霉亲和素同铕标记二乙烯三胺五乙酸酐结合制备铕标记链霉亲和素衍生物；生物素同兔抗人 IgG 抗体结合制备生物素化 IgG 抗体，后者在免疫检测系统中可联结铕标记亲和素和抗 CCP 抗体从而形成复合物。最后通过测量Eu3＋-链霉亲和素在615 nm 的荧光值计算血清抗 CCP 抗体水平。结果该方法具有更宽的线性范围，其线性范围为0．58-9463 U／ml，而应用 ELISA 试剂盒检测线性范围只有18．48-591．4 U／ml。此外，该方法的抗 CCP 抗体检测限可达0．5 U／mL。回收率为96．45-104．63％。用 BAS-TRFIA 和 ELISA 法测得的值具有很好的相关性（R 2＝0．8927）。结论本研究数据表明我们的建立的 BAS-TRFIA 法在测定抗 CCP 抗体上较传统 ELISA 试剂盒有很大改进，为 RA的诊断和治疗提供了一个更为理想的免疫方法学选择。