细菌性肺炎快速诊断基因芯片的初步构建

目的：根据细菌16 S rRNA基因特点设计常见病原菌的特异性探针，采用酶显色技术构建基因芯片，探讨其临床应用的可能性。方法选取肺炎链球菌、流感嗜血杆菌及铜绿假单胞菌等8种细菌性肺炎常见的病原菌的标准菌株作为研究对象，并选择12份患者的痰液标本进行检测。在16 S rRNA基因保守区设计 PCR反应的通用引物及革兰阳性菌、革兰阴性菌的通用探针，利用可变区的差异设计合成特异性探针，构建基因芯片。利用细菌16S rRNA基因设计的PCR通用引物进行扩增，所有8种细菌均获得350 bp的扩增产物。以地高辛标记特异性探针，构建完成可用于8种常见病原菌检测的基因芯片，结果8种标准菌株基因芯片检测均取得了预期效果，对12份痰标本中常规培养阳性7份，其对应芯片检测结果均成阳性，5份常规培养阴性的标本中，芯片结果提示阳性的有3份，其中1份为嗜肺军团菌，2份为使用抗生素后的患者标本。结论设计合成的 PCR通用引物对扩增细菌的16 S rRNA基因具有较高的特异性及灵敏度。构建的基因芯片可用于常见细菌性肺炎病原菌的检测鉴定，且对抗生素使用后的临床标本及苛养菌有一定的诊断价值。本研究所获得基因芯片对于细菌性肺炎的检测具有简单、快速、特异性及敏感性高的特点。