小鼠 Sca-1阳性心脏干细胞的分离提取和表型鉴定

【目的】探索可靠的小鼠心脏干细胞（ cardiac stem cells ，CSCs）分离方法，并对体外培养的 CSCs进行表型鉴定。【方法】选用 SPF 级3～4周龄 ICR 小鼠，无菌条件下处理心脏组织，胶原酶 A 消化，40μm 筛网过滤，制备单细胞悬液，利用免疫磁珠分选法结合抗干细胞抗原‐1（stem cell antigen‐1，Sca‐1）的磁珠抗体来分离 Sca‐1阳性干细胞，并进一步行免疫荧光、流式细胞及基因表达等鉴定。【结果】利用磁珠分选法结合特异的抗 Sca‐1的磁珠抗体，成功地从小鼠心脏组织中分离出 Sca‐1阳性细胞群。这些细胞具有小、圆、亮等特征，能在体外培养扩增，传代后仍绝大部分表达 Sca‐1抗原，但基本不表达内皮系或造血细胞系的特异抗原 c‐kit 、Flk‐1、CD31、CD34、CD45等。这些 Sca‐1阳性细胞表达多能干细胞特征的 Nanog 、TERT 基因，心脏胚层特异的 ISL‐1、TBX5基因及心肌特异性转录因子 GATA4、Nkx2．5、MEF2C ，但不表达成熟心肌的标志基因α‐M HC 。【结论】利用磁珠分选法结合抗特异干细胞表面标志物 Sca‐1的磁珠抗体能在短期内获得高纯度的Sca‐1阳性 CSCs ；小鼠 Sca‐1阳性 CSCs 能在体外培养增殖，有助于 CSCs 相关的组织工程或分子机制的实验研究。