C57BL/6小鼠心肺复苏后心肌细胞线粒体自噬及细胞凋亡的相互作用与调节机制的研究

目的:探讨在心搏骤停心肺复苏系统性缺血再灌注损伤过程中,C57BL/6小鼠心室肌细胞线粒体自噬与细胞凋亡之间的相互作用和调控机制.方法:80只健康雄性C57BL/6小鼠应用高钾合并窒息法制备心搏骤停心肺复苏模型.其中6只复苏前组,74只小鼠造模.造模小鼠中有50只自主循环恢复(ROSC),将其随机分为复苏后2、12、24、48 h组.应用透射电镜检测心肌细胞线粒体形态;应用Western blot检测线粒体自噬蛋白表达和蛋白磷酸化表达,检测与线粒体相关的细胞凋亡信号通路的蛋白表达和蛋白磷酸化表达.结果:C57BL/6高钾心搏骤停心肺复苏小鼠模型在复苏后48 h内线粒体自噬特异性信号蛋白LC3-Ⅱ表达持续显著增加,启动线粒体自噬的蛋白ULK1表达也持续增加.在复苏后12、24、48 h C57 BL/6小鼠通过mTOR磷酸化ULK1抑制线粒体自噬过度增加.C57BL/6小鼠在复苏后2、12 h凋亡信号caspase-9蛋白活化增加,复苏后24、48 h caspase-9蛋白激活逐步减少.心肺复苏后抑制凋亡因子Bcl-2未被明显激活.蛋白细胞色素C(Cyt c)和Smac/Diablo是线粒体释放的促进细胞凋亡的信号.C57 BL/6小鼠在复苏后48 h内线粒体释放的Smac/Diablo未见显著增加,线粒体释放的Cyt c在复苏后12 h达到峰值.结论:免疫功能正常的C57BL/6小鼠心肌细胞在心搏骤停心肺复苏系统性缺血再灌注损伤过程中,激活线粒体自噬,清除受损的线粒体.在复苏后24 h抑制线粒体自噬的信号通路也被激活,提示体内的调控机制发挥作用,防止线粒体过度自噬.线粒体释放促进细胞凋亡的信号蛋白Cyt c在复苏后12 h达到峰值.Cyt c与procaspase-9/Apaf 1交联,促使caspase-9活化.