肠道病毒71型RT-LAMP快速检测方法的建立及初步应用

目的 建立手足口病肠道病毒71型(EV71型)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测方法 ,并对其进行应用评价.方法 利用软件针对EV71型病毒特异性基因6个区域设计4条LAMP引物,在普通恒温水箱内65℃保温约1200min完成RT-LAMP扩增,扩增结果 通过电泳和肉眼来判断.利用RT-LAMP和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 同时检测70份EV71型肠道阳性标本;将EV71型的RNA做一系列10倍稀释后用RT-LAMP和RT-PCR方法 进行检测来比较两者敏感度.结果 EV71型出现LAMP特征性梯状条带,肉眼可以判断结果 ;RT-LAMP与RT-PCR方法 检测100份EV71型标本的检出率比较差异无统计学意义(P>0.05);RT-LAMP方法 的敏感度(10.0pg/μL)与RT-PCR方法 相同.结论 建立了一个可以在普通恒温水箱内进行核酸扩增的EV71型RT-LAMP检测方法,初步应用证实该方法有一定的应用前景.