1种人类血小板抗原1~17及Cab等位基因全血直接检测方法的建立

目的 结合靶序列富集多重聚合酶链反应(TEM-PCR)、荧光探针溶解曲线SNP分型和血液直接PCR技术,建立一种方便、准确的人类血小板抗原(HPA)等位基因分型方法.方法 TEM-PCR方法设计HPA1~17、Cab这18种HPA亚型等位基因的引物及荧光探针,使用血液直接PCR酶同时扩增血液标本中的18个等位基因目标片段,并利用荧光探针的溶解温度变化区分不同SNP位点.结果 TEM-PCR可同时扩增18个等位基因的目标片段,并通过溶解峰的Tm值变化区分SNP位点,结果与序列特异性引物聚合酶链反应位点相比较有相同的准确度,且操作更为简便,无需提取血液基因组DNA,无PCR后续电泳步骤,减少污染风险.结论 成功建立了1种基于TEM-PCR,血液直接PCR和荧光探针溶解曲线分析技术检测HPA1~17,Cab等位基因.