环指蛋白6对胰岛素受体底物1泛素化作用的研究

目的：构建环指蛋白6（RNF6）真核表达载体，并探讨其对胰岛素受体底物1（IRS-1）的泛素化作用。方法以人cDNA为模板，PCR 扩增 RNF6全长编码基因，并将其克隆至载体质粒 pcDNA3．1-CHA 中，将重组质粒转染肝癌细胞株 HepG2，利用实时荧光定量 PCR（RT-PCR）、免疫印迹（Western blot）检测细胞内 IRS-1 mRNA 水平及其蛋白表达水平。结果携带RNF6目的基因的质粒转染 HepG2细胞48 h 后 IRS-1的 mRNA 表达水平降低，为对照组的69％，显著低于对照组，差异有统计学意义（P ＜0．01）。结论RNF6引起 IRS-1的表达下调，这一泛素化过程可能导致胰岛素信号转导障碍。