人CyclinD1在毕赤酵母中的表达

目的：克隆人肝癌组织中的Cyclin D1基因，并在毕赤酵母中表达 Cyclin D1蛋白。方法从人肝癌组织中提取RNA，逆转录PCR扩增获得Cyclin D1 cDNA，将PCR产物进行TA克隆和DNA序列分析；阳性TA克隆Cyclin D1片段再亚克隆入毕赤酵母表达载体Ppic9k，甲醇诱导表达。结果逆转录 PCR扩增得到约483 bp的 DNA片段，TA克隆和DNA序列分析结果显示重组片段为人的Cyclin D1基因，Cyclin D1 cDNA亚克隆入 Ppic9k载体的 NotI和 EcoRI位点之间；甲醇诱导得到分子量约36KD的蛋白。结论成功克隆人肝癌组织中的Cyclin D1基因，并且在毕赤酵母中成功表达。