自噬下降对β1受体自身抗体诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用

目的 探讨自噬下降对β1肾上腺素受体自身抗体(β1-AA)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用.方法 使用1μM的β1-AA对H9c2心肌细胞进行处理,Real time-PCR检测自噬相关基因LC3 mRNA表达的改变,Western blot检测LC3、Beclin 1以及P62蛋白表达水平的变化;使用流式细胞术、Caspase-3活性检测及Hoechst 33258染色反映细胞凋亡情况;使用经典的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理30 min,以及mTOR通路抑制剂雷帕霉素(RAPA)预处理1 h后,再给予细胞β1-AA处理,检测此时细胞凋亡的变化情况.结果 与对照组相比,1μM的β1-AA干预H9c2心肌细胞6 h可以明显降低细胞存活率[(83.46±12.87)%比(96.45±6.99)%].与对照组(1.01±0.14)相比,β1-AA干预细胞6 h、12 h、24 h,LC3 mRNA水平依次降低[6 h(0.85±0.11),12 h(0.71±0.10),24 h(0.62±0.07)],LC3Ⅱ和Beclin 1蛋白水平依次降低,P62蛋白水平逐渐增加,表明β1-AA可以引起心肌细胞自噬水平逐渐下降.同时发现,与对照组(1.13±0.24)相比,β1-AA干预细胞6 h、12 h,细胞凋亡水平明显升高,分别达到3.21±0.89和2.14±0.24.使用经典自噬抑制剂3-MA预处理心肌细胞30 min抑制自噬后,H9c2心肌细胞凋亡水平较β1-AA单独处理组显著增加[(41.45±6.37)%比(29.55±4.32)%];而使用经典mTOR通路抑制剂RAPA预处理心肌细胞1 h上调自噬后,心肌细胞凋亡水平较β1-AA单独处理组明显下降[(17.36±2.98)%比(29.55±4.32)%],说明自噬水平改变可以影响心肌细胞凋亡水平.结论 自噬下调能够增加β1-AA诱导的H9c2心肌细胞凋亡.