多重PCR-毛细管电泳检测儿童5种腹泻病毒的方法建立及应用

目的 建立肠道腺病毒(Adv)、诺如病毒G1及G2型(NoV G1和NoV G2)、A组轮状病毒(RV A)、扎如病毒(SV)及星状病毒(HAstV)5种儿童腹泻病毒多重PCR-毛细管电泳法检测体系.方法 针对Adv、NoV G1、NoV G2、RV A、SV及HAstV保守序列设计特异性引物,设计并优化腹泻病毒的多重PCR-毛细管电泳检测体系,琼脂糖凝胶电泳确认扩增片段;进行性能(灵敏度、特异性)评估;收集185例儿童病毒样腹泻样本,采用多重PCR-毛细管电泳体系进行检测,并通过测序验证阳性结果 .结果 所设计引物特异性扩增出5种腹泻病毒;多重PCR-毛细管电泳检测体系检出限为102～103 copies/μL,CV均<10％;其他腹泻病原体未出现交叉反应,无明显的非特异杂峰,特异性较好;185例临床病毒样腹泻样本检测阳性132例(71.35％),其中RV A 105例(56.8％)、Adv 22例(11.9％)、SV 15例(8.1％)、NoV G211例(5.9％)和HAstV 10例(5.4％),其中包括双病毒感染样本;毛细管电泳进样量需20μL,3 h内完成全部分析;测序结果 与GeneBank比对分析,序列一致.结论 成功建立一种能够快速筛查5种常见儿童腹泻病毒的多重PCR-毛细管电泳检测方法 .