多发性肌炎/皮肌炎患者血清中外泌体的分离鉴定

目的 从多发性肌炎/皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis,PM/DM)患者外周血血清中分离鉴定外泌体(exosome),并进行初步的蛋白质研究.方法 用ExoQuickTM试剂盒分离纯化PM/DM患者血清exosome;透射电镜观察其形态特征,Nanosight 可视型纳米颗粒分析仪检测粒径大小分布情况;western blot鉴定exosome的表面标志物CD9,CD81,Flotillin-2;BCA法对其所携带的蛋白质进行定量分析;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析其蛋白质组分.结果 透射电镜下患者血清exosome呈圆形或椭圆形膜性小囊泡,直径分布范围92±67 nm;western blot结果表明,PM/DM血清来源的exosome存在表面标志物CD9、CD81、Flotillin-2;BCA法测定PM/DM患者exosome总蛋白浓度为14.68 (6.00,32.55) μg/μ,L,健康组exosome总蛋白浓度为14.09(8.00,23.28) μg/μL,SDS-PAGE显示两组血清exosome均在Mr(×103)为55 ～ 70处有高丰度蛋白质富集,在Mr(×103)为40 ～ 55处存在差异条带.结论 成功从PM/DM患者的外周血中分离出血清exosome,并为寻找差异蛋白质提供实验依据.