优化的日本血吸虫Sj16AA蛋白的原核表达

目的 Sj16蛋白是从日本血吸虫分泌物中分离出的一种具有免疫调节功能的蛋白质,具有诱导器官移植免疫耐受的潜力.但是,在用传统方法合成时,其表达量低,可溶性较差,影响了其生物活性.该实验拟优化Sj16AA的合成方法,为进一步研究其功能提供条件.方法 在Sj16蛋白的DNA序列基础上,进行特定位点的突变修饰,同时针对大肠杆菌表达系统优化密码子.将修饰后的Sj16AA基因定向克隆入pMal-c2X质粒,转入BL21(DE3)菌表达,摸索不同条件下Sj16AA的表达情况.结果 成功制备目的基因片段与载体的连接产物pMal-c2X-Sj16M,转化后的BL21/DE3菌经IPTG诱导可表达与MBP融合的蛋白(约58 kDa),抗MBP抗体能特异性识别该蛋白.结论 相较于传统合成方法,经优化的Sj16AA蛋白表达量较高,可溶性较好,能够更好地应用于器官移植免疫相关的基础和临床研究.