poly(A)聚合酶加尾实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清miR-103方法学建立和初步临床应用

目的 建立ploy(A)聚合酶加尾SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血标本中miR-103的检测方法 ,并进行初步的临床应用研究.方法使用Trizols溶解试剂提取待检标本总RNA,逆转录反应获得cDNA,通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR法测定血清标本miR-103.结果 本方法可以用于定量检测血清miR-103的浓度,其PCR反应熔解曲线表现为单峰状,PCR产物具有特异性,在103～106 copies/μL线性范围间检测重复性好,有良好的线性关系(R2=0.999).2型糖尿病患者标本中miR-103表达水平明显低于健康对照人群,差异有统计学意义(P<0.05).结论 本研究所创立的用于检测血清miR-103的poly(A)加尾实时荧光定量PCR法具有很好的灵敏度和特异性,为进一步应用研究提供方法学保证.