酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B促肿瘤机制的体外研究

目的:探讨酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B (acidic leucine-rich nuclear phosphoprotein 32B, ANP32B) 促进肿瘤发生、发展的分子机制, 为其可能作为治疗靶点提供理论依据.方法:利用免疫沉淀联合质谱技术寻找和验证ANP32B相互作用蛋白;免疫荧光技术检测ANP32B和核浆转运蛋白α6 (karyopherinα6, KPNA6) 在细胞内的定位;采用短发夹RNA (short hairpin RNA, sh RNA) 沉默KPNA6的表达;行GST-pulldown实验明确ANP32B与KPNA6直接结合及相互作用的区域.结果:通过免疫沉淀和质谱鉴定发现, ANP32B与KPNA6间存在相互作用, 两者的结合不依赖ANP32B N端1～161氨基酸序列.体外GST-pulldown实验证实, KPNA6与ANP32B间存在直接的相互作用, 且两者结合依赖ANP32B的核定位信号.利用sh RNA抑制KPNA6的表达后, 并不影响ANP32B的核内定位.结论:ANP32B通过核定位信号序列与KPNA6结合, 两者在细胞核中有明显的共定位, 而敲除KPNA6并不影响ANP32B的核内定位.