环介导等温扩增法快速检测白血病PML/RARα的 方法学建立与初步应用

目的:建立环介导等温扩增LAMP检测PML-RARα融合基因方法,进行APL患者微小残留病的快速检测.方法:登录NCBI在线软件设计多组LAMP引物,并设计验证阶段所需的PCR引物.根据反应时间及特异性对不同LAMP引物组的反应进程和结果进行检测、 筛选.根据同一核酸序列设计PCR引物,用于检测基因表达情况,根据反应液的颜色变化裸眼观察,判断扩增结果.同时,将外引物F3、B3作为PCR引物,用于LAMP方法和PCR方法的比较,分析LAMP方法的特异性和敏感性.结果:LAMP法检测PML-RARα融合基因不需要改变温度,包括变性步骤的全过程都能在等温条件下短时间内完成,可以检测扩增产物或者判定扩增反应发生与否.LAMP法具有不需要特殊试剂,扩增不需要改变反应温度,快速判断结果的特点.结论:LAMP法检测PML-RARα融合基因,具有较高的特异性、 敏感性,是传统RT-PCR和荧光定量PCR的替代方法.