人脐带间充质干细胞分离、鉴定方法及其治疗难治性免疫性血小板减少症的有效性及安全性研究

目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)分离、鉴定方法及其治疗难治性免疫性血小板减少症(ITP)的有效性及安全性.方法 选取2016年12月—2017年7月西安高新医院收治的难治性ITP患者6例.脐带取自足月剖宫产健康产妇,采用酶消化法分离、培养hUC-MSCs,BD FACSCalibur流式细胞仪检测hUC-MSCs免疫表型,成骨、成脂诱导分化实验评估hUC-MSCs分化能力.6例患者均静脉输注hUC-MSCs(1×106/kg),输注后1个月如患者血小板计数≤50×109/L可重复输注1次.所有患者至少随访3个月,随访截至2017-11-01,观察患者临床疗效、复发情况及治疗期间不良反应发生情况,并采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群表达情况.结果 采用酶消化法分离、培养hUC-MSCs,可见原代细胞贴壁生长并逐渐融合成片状,形态均一,倒置相差显微镜下观察细胞类似于成纤维细胞,成长梭形流水状贴壁生长,细胞形态良好,并随着细胞传代,细胞形态未发生变化.流式细胞术检测结果显示, hUC-MSCs高表达CD73、CD90、CD105,表达量均>98.0%;不表达或低表达CD3、CD11b、CD19.成骨、成脂诱导分化实验结果显示,hUC-MSCs能向成骨细胞、脂肪细胞分化.输注hUC-MSCs后,6例患者完全反应3例,有效2例,无效1例,总有效率为5/6;随访期间复发1例,再次输注hUC-MSCs后仍有效.hUC-MSCs输注前后患者外周血CD+3CD+4T淋巴细胞比例、CD+3CD+8T淋巴细胞比例及CD+19B淋巴细胞比例比较,差异无统计学意义(P>0.05);hUC-MSCs输注后CD+16CD+56自然杀伤细胞(NK细胞)比例和CD+4CD+25CD-127辅助性T细胞(Treg细胞)比例均高于hUC-MSCs输注前(P<0.05).本组患者治疗期间2例出现轻度发热,对症处理后完全缓解;1例患者出现激素依赖,经抗病毒治疗后痊愈.结论 采用酶消化法能有效分离、培养hUC-MSCs,流式细胞术及成骨、成脂诱导分化实验能有效鉴定hUC-MSCs分化能力,且hUC-MSCs治疗难治性ITP的近期疗效较好,不良反应轻微,可能成为难治性ITP的新治疗方法.