豚鼠哮喘模型和哮喘患者气管上皮细胞内皮素-1和内皮素转化酶mRNA表达

目的通过逆转录-DNA聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测豚鼠哮喘模型气管上皮内皮素-1(ET-1)mRNA表达,检测哮喘患者气管上皮内皮素-1(ET-1)和内皮素转换酶(ECE) mRNA表达.方法 (1)动物实验部分:Hartley株豚鼠用卵蛋白腹腔注射致敏,雾化吸入激发,提取气管上皮细胞RNA,逆转录将RNA逆转为cDNA,PCR扩增DNA.(2)临床实验部分:设对照组和哮喘组.一步法提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增β-actin片段、ET-1片段和ECE片段.PCR产物的鉴定和半定量.计算ET-1/β-actin值和ECE/β-actin值.结果 (1)动物模型检测:在电泳缓冲液内,紫外灯下可见ET-1为333bp左右条带,与标记DNA条带相对应.(2)临床实验:哮喘组ET-1mRNA表达量明显高于对照组(P＜0.05).哮喘组ECEmRNA表达量与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).结论 RT-PCR技术检测出卵蛋白致敏激发的豚鼠气管上皮细胞ET-1mRNA表达.哮喘患者支气管粘膜ET-1mRNA表达明显增高,而ECEmRNA表达量与对照组比较差异无显著性.