介孔二氧化硅介导的微小RNA-24转染对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 探究介孔二氧化硅纳米颗粒(MSN)搭载的微小RNA-24(miR-24)纳米载体复合物对过氧化氢(H2O2)诱导的早期心肌细胞凋亡的影响.方法 实验分为4组:对照组单纯加入100μl PBS;H2O2组单纯加入终浓度为100 μmol/LH2O2处理24 h;miR-24类似物(miR-24 mimics)组、miR-24抑制剂(miR-24 inhibitor)组在H2O2处理前预先加入功能化后的MSN(F-MSN)搭载的200 nmol/L寡核苷酸预转染24 h.用聚乙烯亚胺对MSN表面进行功能化修饰形成F-MSN,再通过静电吸附作用与miR 24结合形成基因载体复合物F-MSN-miR-24,体外转染后通过荧光定量PCR、Western blotting等评估其对新生大鼠心室肌细胞目的基因及Bcl-2蛋白相互作用的细胞死亡调解子(Bim)的作用,进一步评估其对心肌细胞凋亡的影响.结果 F-MSN可将miR-24高效转入至心肌细胞内,经计数染色阳性细胞得出转染效率可达72％以上.与对照组比较,H2O2组miR-24表达量降低(P＜0.05).与H2O2组比较,miR-24 mimics组的表达量显著提高、miR-24 inhibitor组的表达量显著降低,miR-24mimics组蛋白Bim的表达量显著降低、miR-24 inhibitor组蛋白Bim的表达量显著提高,差异有统计学意义(P＜0.05).miR 24 mimics组心肌细胞存活率显著高于H2O2组[(78.80±1.49)％ vs (67.40±1.63)％,P＜0.05].结论 MSN搭载的miR-24转染可以将目的基因高效转入至靶细胞,其发挥的生物学效应可以显著抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡,促进心肌细胞存活,为MSN用于心血管疾病的基因治疗提供了新思路.