过表达miR-155对强直性脊柱炎滑膜细胞凋亡的影响及作用机制探讨

目的 探讨过表达miR-155对强直性脊柱炎滑膜细胞凋亡的影响及作用机制.方法 选择2018年5—7月四川省遂宁市中心医院风湿免疫科收治的强直性脊柱炎患者,取其滑膜细胞进行试验.构建miR-155慢病毒表达载体,并在293 T细胞中获得重组慢病毒,经感染NP细胞得到稳定过表达细胞系GV369-miR-155-NP(GV369-miR-155-NP组),同时设置空载体GV369-NP组和空白组.荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白GFP的表达,RT-qPCR方法检测miR-155的表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因分析验证miR-155与FasL的靶向关系,Western-blot法检测细胞中凋亡相关蛋白FADD、Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达,试剂盒检测细胞线粒体膜电位的变化情况.结果 在荧光显微镜下观察,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白组细胞未见绿色荧光.与空白组比较,GV369-miR-155-NP组中miR-155、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高,而细胞凋亡率、FADD、Caspase-3和Bax的表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(t/P=12.399/0.000、8.658/0.000、4.879/0.002、12.612/0.000、8.450/0.000、7.711/0.000、6.977/0.001);GV369-NP组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05).荧光素酶报告基因分析证实miR-155与FasL存在靶向关系.结论 miR-155可抑制强直性脊柱炎滑膜细胞发生凋亡,既可通过靶向调控外源性FasL/Fas通路参与Caspase-3和FADD介导的细胞凋亡,也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用.