心肌细胞中微小核糖核酸 let-7c对肌营养素基因表达的调控作用

目的：探讨心肌细胞中微小核糖核酸（miR）let-7c（miR-let-7c）对肌营养素基因表达是否具有调控作用以及可能的作用机制。
　　方法：首先构建携带肌营养素基因3'非编码区（3'-UTR）片段的荧光素酶报告基因载体，与miR-let-7c前体共转染Hela细胞，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性以验证miR-let-7c与肌营养素基因的靶向调控关系。进而培养大鼠心肌细胞H9c2，Taqman实时定量聚合酶链式反应（PCR）法检测miR转染效果，蛋白免疫印迹（Western blot）法检测miR-let-7c及miR-let-7c抑制物转染心肌细胞后肌营养素蛋白表达，以及心肌肥厚相关信号通路分子核转录因子-κB（NF-κB）的活性变化。
　　结果：荧光素酶活性实验结果表明，与重组荧光素酶报告基因表达载体（pMIR-MTPN）+ miR前体阴性对照组相比，pMIR-MTPN+ miR-let-7c前体组荧光素酶活性显著降低[（59.30±9.90）% vs （98.10±15.10）%]。Western blot结果表明，miR-let-7c前体组与miR阴性对照组相比，肌营养素蛋白表达水平显著降低[（0.28±0.05） vs （0.90±0.09）]，此外，NF-κB蛋白水平显著降低[（0.25±0.06） vs （0.75±0.07）]；相反，miR-let-7c抑制物组与抑制物阴性对照组相比，肌营养素蛋白表达水平显著升高[（1.14±0.09） vs（0.44±0.09）]，同时，NF-κB蛋白水平也显著升高[（1.09±0.05） vs（0.71±0.06）]，差异均有统计学意义（P <0.05）。
　　结论：miR-let-7c能够通过作用于3'UTR区域，抑制肌营养素基因表达，并影响心肌肥厚关键信号通路分子NF-κB的活性。