microRNA-10a抑制结肠癌肝转移肿瘤相关成纤维细胞活性的研究

目的:探讨microRNA-10a(miR-10a)对肝脏微环境中肿瘤相关成纤维细胞(TAFs)的增殖、迁移以及促炎性因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素1(IL-1)β mRNA表达水平的影响。方法:收集同一结肠癌患者癌旁正常肝组织和转移至肝脏的病灶组织，采用组织块法建立原代人肝正常成纤维细胞(NFs)和原代TAFs。通过形态学观察和细胞免疫荧光染色对NFs和TAFs进行鉴定，并通过流式细胞术鉴定二者的纯度。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NFs和TAFs中miR-10a的表达水平，并在低表达miR-10a的细胞中过表达miR-10a。随后采用CCK-8实验、划痕实验和RT-qPCR分别检测miR-10a对该细胞增殖、迁移能力以及IL-6、IL-8、IL-1β mRNA表达水平的影响。结果:细胞免疫荧光染色显示人细胞角蛋白18(CK-18)在NFs和TAFs中均不表达；成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)在两细胞中均表达；α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在NFs中弱表达，在TAFs中强表达。流式细胞术显示NFs与TAFs中α-SMA阳性率为95.0%和95.3%。miR-10a在TAFs的表达水平为NFs的0.65倍( P<0.01)。过表达miR-10a后TAFs在第3、4和5天增殖能力显著低于同时期的阴性对照组细胞( P<0.05， P<0.05， P<0.01)；TAFs的迁移能力在24 h和48 h分别较阴性对照组降低25%和15%( P<0.01， P<0.05)，TAFs中IL-6、IL-8、IL-1β的表达水平分别较阴性对照组降低54%、27%和42%( P<0.01， P<0.01， P<0.05)。 结论:miR-10a在TAFs中呈低表达，miR-10a过表达抑制了TAFs的增殖和迁移，并降低炎性因子IL-6、IL-8、IL-1β mRNA的表达，这可能是TAFs抑制肝脏形成转移灶的重要因素。