肉桂酸对肿瘤坏死因子诱导血管内皮细胞组织因子表达的作用及其机制

目的:观察肉桂酸(CINN)对TNF-α诱导人脐静脉血管内皮细胞株ECV 304表达组织因子(TF)的影响,并探讨其作用的细胞内信号传导机制.方法:内皮细胞培养采用RPMI-1640完全培养基;一期凝固法测总的细胞促凝活性(PCA):TF mRNA采用RT-PCR的方法检测;用免疫组织化学染色法观察NF-κB的变化;Westem-blod方法检测胞浆中I-κB的变化.结果:(1)与对照组相比,TNF-α(1 000u/ml)引起ECV 304的PCA增加(P＜0.01),但可以被TF单抗阻断,其阻滞作用随TF单抗的增加而增加(P＜0.05),由此证明血管内皮细胞的PCA来自于TF.在给予TNF-α之前30 min用不同浓度的CINN预处理ECV 304细胞,可以明显抑制TNF-α(1 000 u/ml)刺激内皮细胞表达TF的作用,具有显著的量效关系(r=-0.953,P＜0.05).在500μg/ml时,CINN有轻度抑制TF基础表达的效应;但以CINN预处理ECV 304,可使TNF-α刺激TF的活性下降90%(P＜0.001);CINN也可显著降低受刺激的ECV 304TF mRNA表达.(2)Western-blot发现TNF-α作用45 min胞浆中I-κB减少最明显,CINN预处理后,I-κB的减少不明显;免疫组织化学染色发现TNFα作用1h可引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,CINN可抑制NF-κB的活化.结论:CINN抑制血管内皮细胞对TNFα诱导的TF表达,它是通过影响NF-κB的活化发挥作用的.