小干扰RNA抑制缺氧诱导因子-1α表达对食管癌细胞糖酵解的影响

目的 观察人食管鳞状细胞癌细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对糖酵解的影响并探讨其可能的作用机制.方法 TEl3、Ecal09细胞常氧(O2体积分数为0.20)及缺氧(O2体积分数为0.01)培养,缺氧时间为6、12、24、48 h,RNA干扰法稳定静默HIF-1α获得TE13/小干扰(si)HIF、Eca109/siHIF细胞,培养方法和时间同TE13、Eca109.Western印迹法检测HIF-1α的表达变化；分光光度法检测培养上清液中乳酸浓度变化；实时定量PCR检测葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的mRNA表达变化；Western印迹法检测GLUT-1、LDHA蛋白表达变化.t或t'检验用于分析不同缺氧时间对HIF-1α蛋白表达的影响,组间差异比较采用单因素方差分析.结果 TE13、Eca109细胞缺氧后HIF-1α表达增强,12h达高峰(t=6.11,8.31,P＜0.05).常氧条件下,TE13/siHIF和Eca109/siHIF细胞乳酸分泌分别为(1.24±0.33)、(1.28±0.37) mmol/L,较TE13和Eca109细胞显著下降[(3.25±1.34)、(4.91±1.69) mmol/L,t=2.53、3.59,P均＜0.05]；TE13、Eca109细胞缺氧后乳酸分泌增多[(6.48±1.73)、(8.02±1.95) mmol/L,t=2.715、2.050,P均＜0.05],TE13/siHIF、Eca109/siHIF细胞缺氧后乳酸分泌无明显增多(P＞0.05).TE13/siHIF和Eca109/siHIF细胞中,GLUT-1、LDHA的mRNA表达均明显受抑(常氧:t=6.98、3.92、7.25、3.67,P均＜0.05),GLUT-1蛋白表达明显减弱(常氧:t=4.57、16.56,缺氧:t=6.19、6.09,P均＜0.05),LDHA蛋白表达稍减弱(P＞0.05).结论 抑制人食管鳞状细胞癌中HIF-1α可降低细胞的糖酵解水平,该途径可能涉及GLUT-1、LDHA的表达抑制；除HIF-1α以外,LDHA的蛋白表达可能同时存在其他调控因素.