核糖核酸干扰缺氧诱导因子-1α对食管鳞癌细胞的抑制效果研究

目的 探讨人食管鳞癌细胞系Eca-109中RNA干扰抑制缺氧诱导因子(HIF)-1α的体内、外实验效果.方法 用针对HIF-1α mRNA的小发夹RNA(shRNA)真核表达载体转染人食管鳞癌细胞Eca-109,检测HIF-1α、基质金属蛋白酶(MMP)-2、葡萄糖载体蛋白(GLUT)-1表达,挑选干扰效果最好的细胞命名为Eca-109/shRNA,流式细胞仪检测细胞凋亡率.6周龄BALB/C裸鼠30只,按皮下注入细胞不同均分为三组,A组为Eca-109,B组为转染空质粒Eca-109(Eca-109/Neo),C组为Eca-109/shRNA.观察肿瘤出现时间,测量裸鼠体质量、瘤体大小,计算肿瘤体积.28 d后处死全部裸鼠,取瘤体称重.用Western印迹法检测肿瘤组织HIF-1α蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)、凋亡抑制蛋白bcl-2和生存素的表达.结果 Eca-109/shRNA细胞的HIF-1α蛋白表达明显被抑制,同时MMP-2,GLUT-1表达也明显下调,细胞凋亡率为(21.32±1.12)%,比Eca-109细胞和Eca-109/Neo细胞[(1.17±0.85)%和(5.31±1.46)%]明显升高(P＜0.01).A、B组裸鼠接种1周左右成瘤,C组裸鼠2周左右成瘤,成瘤时间较A、B组延迟,且瘤体生长减慢.28 d后移植瘤体积:A组为(1.29±0.34)cm3,B组为(1.19±0.35)cm3,C组为(0.45±0.20)cm3.瘤重:A组为(0.73±0.13)g,B组为(0.71±0.15)g,C组为(0.21±0.11)g.C组与A、B组比较移植瘤体积和瘤重差异均有统计学意义(P值均＜0.01),抑瘤率达65%.Western印迹检测蛋白表达,C组HIF-1α、VEGF、bcl-2和生存素表达均比A、B组明显减少(P值均＜0.01).结论 在食管癌Eca-109细胞中利用RNA干扰HIF-1α能抑制肿瘤生长,其机制为抑制VEGF介导的肿瘤血管生成和无氧糖酵解,可能与影响bcl-2和生存素的表达,促进肿瘤细胞凋亡有关.