敲低Tribbles同源蛋白3抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖
Chinese Journal of Gerontology(2019)
Abstract
目的 研究敲低Tribbles同源蛋白(TRIB)3对血管紧张素(Ang)Ⅱ售导的心肌成纤维细胞增殖的影响.方法 用AngⅡ处理心肌成纤维细胞,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹法检测细胞中TRIB3表达情况.心肌成纤维细胞转染TRIB3 siRNA慢病毒载体,经AngⅡ处理后,qRT-PCR和Western印迹检测干扰效率.噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,羟脯氨酸法检测胶原合成,Western印迹法检测细胞中Ⅰ型胶原(COLL)Ⅰ、COLLⅡ和基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达,硝酸还原法检测培养液中一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性.结果 AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞中的TRIB3表达水平升高(P<0.01).TRIB3 siRNA慢病毒载体可明显下调AngⅡ条件下心肌成纤维细胞中TRIB3的表达水平(P<0.05).AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞增殖能力升高(P<0.05),细胞胶原合成增多(P<0.05),细胞中COLLⅠ、COLLⅡ蛋白水平升高(P<0.05),MMP-2水平降低(P<0.05),培养液中NO含量降低(P<0.05),iNOS活性降低(P<0.05).下调TRIB3能够降低AngⅡ条件下心肌成纤维细胞增殖能力(P<0.05),减少细胞胶原合成(P<0.05),降低细胞中COLLⅠ、COLLⅡ蛋白表达(P<0.05),促进细胞中MMP-2蛋白表达(P<0.05),促进细胞分泌NO(P<0.05),提高细胞iNOS活性(P<0.05).结论 敲低TRIB3能够抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,减少胶原合成,促进细胞分泌NO.
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