乙肝病毒X蛋白对肝星状细胞活化的影响及可能机制

目的 探讨乙肝病毒X(HBx)蛋白对肝星状细胞(HSC)活化的影响及其可能机制.方法 构建稳定转染HBx基因的L02肝细胞(L02-HBx),Western印迹鉴定细胞株中HBx蛋白的稳定表达.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测L02-HBx 细胞培养上清中转化生长因子(TGF)-β1的表达.以L02-HBx、转染空质粒(L02-pcDNA3. 1)和未转染肝细胞(L02)的条件培养基,分别孵育HSC株LX-2,即LX-2/L02-HBx、LX-2/L02-pcDNA3. 1、LX-2/L02,Western印迹检测上述各组细胞HSC活化标志α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和NADPH氧化酶(NOX)4蛋白表达.以L02-HBx的条件培养基孵育LX-2细胞,分为转染si-NOX4(LX-2/L02-HBx+si-NOX4)、无关干扰片段(LX-2/L02-HBx+snc-RNA)、未转染(LX-2/L02-HBx)3组,Western印迹检测各组LX-2细胞的α-SMA蛋白表达.在L02-HBx 的条件培养基中加入转化生长因子( TGF)-β1受体抑制剂,孵育LX-2细胞株,并以Western印迹检测NOX4的表达.结果 Western印迹结果显示,L02-HBx中稳定表达HBx蛋白;ELISA结果显示,L02-HBx培养上清液中TGF-β1的表达显著高于L02-pcDNA3. 1、L02细胞(P<0. 01). Western印迹结果显示,LX-2/L02-HBx细胞中α-SMA和NOX4的蛋白表达显著高于LX-2/L02-pcDNA3. 1、LX-2/L02细胞(P<0. 01);LX-2/L02-HBx细胞敲减NOX4后(LX-2/L02-HBx+si-NOX4),α-SMA的蛋白表达显著低于LX-2/L02-HBx+ snc-RNA和LX-2/L02-HBx细胞(P<0. 05).以加入TGF-β1受体抑制剂的L02-HBx条件培养基孵育LX-2,其NOX4的表达显著低于对照组.结论 肝细胞中表达的HBx蛋白可以通过旁分泌TGF-β1上调HSC中的NOX4表达,NOX4进一步促进HSC的活化,从而促进肝纤维化的发生.