大电导钙激活钾通道介导血管平滑肌细胞增殖及其机制

目的：探讨大电导钙激活钾通道（ BKca）是否通过Ras-Raf-MEK1／2-ERK1／2信号途径影响兔主动脉血管平滑肌细胞（ VSMC）的增殖。方法用低浓度的四乙胺（TEA）处理体外传代培养的家兔胸主动脉VSMC。采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）和流式细胞术（FCM）检测TEA对VSMC的增殖和细胞周期的影响，分别采用免疫组化法和免疫印迹法检测增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）、磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（P-ERK1／2）蛋白表达。结果（1）MTT法检测结果显示，TEA能够呈时间依赖性和剂量依赖性地降低吸光值、增加细胞抑制率（P＜0.05）；（2）流式细胞术分选结果显示，TEA处理48 h后能够呈剂量依赖性地增加G1期细胞比例，减少S期、G2期细胞比例（P＜0.05）；（3）免疫组化检测结果显示，随着TEA浓度的增加，VSMC的PCNA阳性表达率逐渐下降（P＜0.01）；（4）免疫印迹法结果表明，经400μmol／L的 TEA处理48 h后，ERK1／2、P-ERK1／2蛋白表达，ERK活化率与未经处理的对照组比较，均无统计学意义（t＝0.354～1.035，P＞0.05）。结论 TEA 可呈浓度依赖性地阻止细胞周期由G1向S期推进，抑制VSMC增殖；该过程的分子机制不经由Ras-Raf-MEK1／2-ERK1／2信号途径介导。