水飞蓟素保护肾小球内皮细胞氧化损伤的效应与SIRT1及腺苷酸活化蛋白激酶α的作用机制

目的：研究水飞蓟素对肾小球内皮细胞氧化损伤的保护作用及SIRT1和腺苷酸活化蛋白激酶（ AMPK）α在其中的作用机制。方法使用1×105 nmol／L H2O2处理肾小球内皮细胞，构建氧化应激细胞模型。 MTT实验法检测水飞蓟素对氧化应激造成的肾小球内皮细胞损伤的影响。实时定量RT-PCR法测定水飞蓟素对氧化应激损伤的肾小球内皮细胞SIRT1和AMPKαmRNA水平的影响。 Western 印迹法测定水飞蓟素对氧化应激损伤的肾小球内皮细胞SIRT1，AMPK和AMPKα磷酸化蛋白水平的影响。结果1×105 nmol／L H2O2处理肾小球内皮细胞后，细胞存活率显著降低，而1μg／ml和5μg／ml的水飞蓟素处理可以显著提高细胞存活率。实时定量RT-PCR结果显示，5μg／ml的水飞蓟素处理显著提高了肾小球内皮细胞SIRT1 mRNA水平，而对AMPKαmRNA水平无显著影响。 Western 印迹结果显示，H2 O2处理后，细胞的 SIRT1蛋白水平和 AMPKα磷酸化蛋白水平未出现显著变化，但AMPKα蛋白水平显著降低。1μg／ml和5μg／ml的水飞蓟素处理显著提高了细胞SIRT1蛋白水平和AMPKα磷酸化蛋白水平；H2 O2处理后细胞的AMPKα蛋白水平显著降低，而1μg／ml和5μg／ml的水飞蓟素处理显著提高了 AMPKα蛋白水平，和对照组无显著差异。结论水飞蓟素可能通过调节细胞内SIRT1及AMPKα蛋白的表达及AMPKα磷酸化发挥抗氧化损伤作用而保护肾小球内皮细胞。