家族型帕金森病α－突触核蛋白突变体寡聚化对神经元毒性的影响

目的：观察家族型帕金森病（PD）α－突触核蛋白（α－Syn）突变体 A53T和 A30P聚集体对大鼠原代神经元的神经毒性。方法取大鼠前脑皮质神经元进行原代培养，在培养基中加入体外孵育的α－Syn聚集体。培养14 d后，MTT法和神经元流式细胞术观察神经元的细胞活力。免疫荧光染色后以激光共聚焦显微镜观察细胞内聚集体的分布。硫磺素S染色观察细胞内包涵体的形成。结果加入α－Syn聚集体各组的原代神经元细胞活力较对照组降低（P＜0．05），而加入突变体A53T和A30P聚集体的原代神经元细胞活力比对照组明显降低（P＜0．01）；突变体A53T和A30P聚集体的原代神经元细胞活力下降较野生型α－Syn聚集体显著（P＜0．05）。突变体A53T和A30P聚集体对神经元的毒性作用，在1～14 d内随培养时间而增加（P＜0．05）；在1～10μmol／L浓度范围内，随浓度的增加而毒性增加（P＜0．05）。突变体A53T和A30P聚集体可以进入原代神经元内，并可在细胞内聚集而形成硫磺素S染色阳性的斑块。结论家族型α－Syn突变体A53T和A30P聚集体对原代神经元具有神经毒性，此作用具有时间和剂量依赖关系。这一现象对阐明家族型PD的发病机制具有重要意义。