CCHFV S基因的重组杆状病毒的构建及鉴定

目的 利用杆状病毒表达系统(baculovirus expression vector systems,BEVS)构建含有克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV)S基因的重组杆状病毒,并在sf9昆虫细胞中表达出核衣壳蛋白(nucleoprotein,NP).方法 将合成的CCHFV S基因定向克隆入杆状病毒转移载体pFastBac?Dual,获得重组的转移载体pFastBac?Dual-CCHFV-S.将其转化到E.coli DH10Bac?感受态细胞中,筛选得到重组杆状病毒杆粒rBV-Bacmid-S.用Cellfectin?Ⅱ试剂将rBV-Bacmid-S转染入sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-CCHFV-S.通过IFA和Western blot检测CCHFV S基因的表达.结果 构建了含有S基因的rBV-CCHFV-S,在sf9昆虫细胞中成功表达CCHFV NP.结论 利用BEVS可以成功表达CCHFV NP,这为研究CCHFV NP的生物学特性,研制特异性的治疗药物和预防控制疫苗奠定基础.