过表达N-cadherin基因慢病毒表达载体的构建及稳定细胞株的建立

目的 建立稳定过表达N-cadherin的人类胃癌MGC-803细胞系.方法 从含有N-cadherin的质粒中利用PCR技术克隆N-cadherin基因编码序列.制备并浓缩慢病毒颗粒,将构建好的过表达N-cadherin慢病毒载体感染MGC-803细胞,并稳定遗传,嘌呤霉素筛选的阳性克隆传代培养5代后鉴定细胞内N-cadherin的表达.结果 荧光显微镜下过表达N-cadherin组细胞有绿色荧光表达;PCR扩增得到含N-cadherin基因编码序列的特异性条带;重组的过表达N-cadherin载体中,过表达N-cadherin编码序列与目标序列几乎一致;Western blotting结果显示,在分子量为98 kD处有相应条带.结论 成功建立稳定过表达N-cadherin的人类胃癌MGC-803细胞,此研究为进一步探讨N-cadherin基因的功能提供了良好的研究基础.