平滑肌细胞caveolae在大鼠肾动脉收缩反应调控中的作用研究

目的 探讨平滑肌细胞caveolae在大鼠肾动脉对不同血管活性药物收缩反应中的作用及其机制.方法 采用单独甲基-β-环糊精(methyl-beta-cyclodextrin,MCD)或MCD和胆固醇(cholesterol,CHO)孵育肾动脉以减少和增加平滑肌细胞caveolae含量,并与未处理组[二甲基亚砜(DM-SO)组比较].采用电镜观察caveolae数量,采用血管环张力描记技术检测肾动脉对氯化钾(potassium chloride,KCl)、苯肾上腺素(phenylephrine,PE)和血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)的收缩反应,采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测法、荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测caveolin-1及血管紧张素受体1型(Angiotensin type 1 receptor,AT1R)的基因和蛋白表达,采用免疫沉淀和Western blot检测caveolin-1与AT1R的结合.结果 MCD单独孵育可显著降低平滑肌细胞caveolae数量,而MCD与CHO共孵育则可使其恢复,MCD或CHO孵育均未影响caveolin-1基因和蛋白表达.MCD与CHO预处理后,肾动脉对KCl和PE的收缩反应无明显改变.但与未处理组相比,MCD单独孵育可使动脉对AngⅡ的收缩反应强度显著降低(P＜0.05),收缩敏感性显著减弱(P＜0.05),而MCD与CHO共孵育则可使动脉对AngⅡ的收缩反应强度及敏感性恢复正常水平.CHO与MCD对AT1R的蛋白表达水平无明显影响.在正常动脉,AngⅡ作用后caveolin-1与AT1R的结合显著增加(P＜0.05),而在MCD孵育动脉,这种反应被明显抑制,CHO则可使其恢复正常水平.结论 平滑肌细胞caveolae是大鼠肾动脉收缩功能调控的重要机制,其主要通过影响caveolin-1与AT1R的结合而调控其下游通路.