从Wnt通路抑制因子表观遗传修饰调控研究重楼皂苷Ⅶ抗结直肠癌机制

目的 从Wnt通路抑制因子表观遗传修饰调控研究重楼皂苷Ⅶ(PPLVⅡ)抗结直肠癌机制.方法 实验分三组,空白对照组、结直肠癌模型组和PPLVII治疗组.采用TUNEL法检测小鼠的细胞凋亡情况,TOPglow/FOPglow TCF试剂盒用于检测Wnt信号传导途径活性,应用双抗体夹心法ELISA(sandwich ELISA)检测cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、Bax、Bcl-2以及Cdk-4、Cdk-6、Cyclin D1和p21的表达,用免疫蛋白印迹检测细胞中的β-连环蛋白,实时荧光定量PCR检测干细胞相关基因OCT4、SOX2、c-Myc和TCF4的表达,检测lgG、β-catenin和H3k9Ac与MMP-9启动子的结合.结果 TUNEL免疫组织化学分析与对照组相比,PPLVII诱导肿瘤细胞凋亡;PPLVII治疗后cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9和Bax表达增加,而Bcl-2则降低,差异有统计学意义(P<0.05);Cyclin D1、CDK-4、CDK-6表达下降,而p21表达上调,差异有统计学意义(P<0.01);PPLVII干预治疗后检测治疗组的TOP/FOP比率降低,差异有统计学意义(P<0.05);在PPLVII进行干预治疗后β-连环蛋白灰度值下降,差异有统计学意义(P<0.05);PPLVII进行干预治疗后OCT4、SOX2、c-Myc和TCF4相关基因的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 重楼皂苷Ⅶ干预治疗通过降低Wnt通路抑制因子的表达对结直肠癌有一定的改善和治疗作用.