京尼平对脂多糖介导的血管通透性增加的影响及其可能机制
Chinese Journal of Multiple Organ Diseases in the Elderly(2019)
摘要
目的 探讨京尼平对脂多糖(LPS)介导的血管通透性增加的影响及可能机制.方法 体外实验:将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为4组,对照组仅接受0.1%的二甲基亚砜(DMSO)处理24.5 h(DMSO);模型组接受同等浓度DMSO预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育24 h(DMSO+LPS);治疗组接受京尼平50μmol预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育(京尼平+LPS);抑制剂组接受10μmol EX527及京尼平50μmol预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育(京尼平+EX527+LPS).检测各组细胞内皮通透性Pa值(Transwell法)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性(酶标仪检测荧光强度)、Sirtuin-1蛋白(SIRT1)表达(Western blotting)、线粒体膜电位变化(JC-1探针法)及细胞凋亡情况(TUNEL染色法).体内实验:另将雌性大鼠24只按随机数表法分为4组,对照组大鼠注射0.5 ml DMSO 30 min后注射生理盐水0.5 ml(DMSO+生理盐水);模型组大鼠注射0.5 ml DMSO 30 min后注射LPS 10 mg/kg(DMSO+LPS);治疗组大鼠注射京尼平5 mg/kg 30 min后注射LPS 10 mg/kg(京尼平+LPS);抑制剂组大鼠接受5 mg/kg京尼平及5 mg/kg EX52730 min后注射LPS 10 mg/kg(京尼平+EX527+LPS).生理盐水或LPS注射60 min后检测大鼠血管通透性 ΔI(FITC-白蛋白荧光法)及SIRT1表达(Western blotting).应用SPSS 20.0软件进行统计分析.根据数据类型,组间比较采用单因素方差分析、LSD两两比较或Tamhane's T2检验;组内比较采用单因素重复测量的方差分析.结果 体外实验:与对照组[Pa:1.00±0.04;caspase-3活性:100.0±4.4;JC-1绿色/红色荧光比例:(100.0±4.8)%;细胞凋亡率:(2.3±1.4)%;SIRT1:(100.0±8.9)%]比较,模型组[1.68±0.09、216.0±23.5、(343.0±28.3)%、(40.8±8.9)%、(61.0±8.5)%],治疗组[1.35±0.07、165.0±15.0、(220.0±13.3)%、(28.2±6.6)%、(86.7±7.6)%]及抑制剂组[1.60±0.10、202.0±16.5、(309.0±18.5)%、(38.0±9.5)%、(64.3±4.8)%]细胞Pa值、caspase-3活性、JC-1绿色/红色荧光比例及细胞凋亡率显著增加,SIRT1水平显著降低;与模型组比较,治疗组Pa、caspase-3、绿色/红色荧光比例及细胞凋亡率显著下降,SIRT1表达显著升高;与治疗组比较,抑制剂组Pa、caspase-3、JC-1绿色/红色荧光比例及细胞凋亡率显著增加,SIRT1表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).体内实验:模型组、治疗组及抑制剂组大鼠在LPS注射30 min及60 min后,与处理前及对照组比较血压明显下降(P<0.05),但3组大鼠间血压比较差异无统计学意义(P>0.05).与对照组[SIRT1:(100.0±4.0)%,ΔI:(0.12±0.03)]比较,模型组[(49.3±8.3)%、0.54±0.07],治疗组[(87.3±4.7)%、0.32±0.05]及抑制剂组[(55.3±4.9)%、0.53±0.06]SIRT1表达量显著降低,ΔI显著增加;与模型组比较,治疗组SIRT1表达显著上升,ΔI显著减弱;与治疗组比较,抑制剂组SIRT1表达显著降低,ΔI显著增强,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 京尼平通过抑制线粒体凋亡信号激活最终抑制LPS介导的血管通透性增加,其作用可能与上调SIRT1有关.
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