中药复方含药血清对体外培养的肾小球系膜细胞的作用

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾小球系膜细胞ROS、RAGE mRNA和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,以及中药复方(由太子参、生黄芪、白术、川连、泽兰、丹参、全瓜蒌5 g等组成)的干预作用.方法:原代培养大鼠肾小球系膜细胞,细胞在DMEM/F12培养液中培养传代(37 ℃,5％ CO2),取5～8代细胞用于实验.随机分为正常糖浓度组(含5.5 mmol/L)、高糖浓度组(30 mmol/L)、AGE-BSA组、中药复方+高糖组、中药复方+AGE-BSA组.分别于培养12、24、48 h时用0.25％胰蛋白酶消化液消化并收集细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,RT-PCR法检测细胞RAGE mRNA、CTGF mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞内ROS表达.结果:高糖作用24 h和48 h的系膜细胞增殖显著高于正常组(P＜0.05),AGE-BSA组12h、24 h和48 h的细胞增殖均有明显增加(P＜0.05),中药复方加高糖组较高糖组细胞增殖显著降低(P＜0.05);中药复方加AGE-BSA组较AGE-BSA组细胞增殖也有明显下降(P＜0.05).高糖组和AGE-BSA组作用12 h、24 h和48 h的系膜细胞ROS表达均明显升高(P＜0.05);中药复方加高糖组作用12h、24 h、48 h较高糖组细胞ROS表达均有下降(P＜0.05).高糖组和AGE-BSA组作用12h、24 h和48 h的系膜细胞CTGF mRNA表达均明显升高(P＜0.05),中药复方加高糖组作用48 h较高糖组细胞CTGF mRNA表达均有下降(P＜0.05).中药复方加AGE-BSA组作用48 h较AGE-BSA组细胞CTGF mRNA也有明显下降(P＜0.05).高糖组和AGE-BSA组作用12 h、24 h和48 h的系膜细胞RAGE mRNA表达均明显升高(P＜0.05);中药复方加高糖组作用12h、24 h、48 h较高糖组细胞RAGE mRNA表达均有下降(P＜0.05);中药复方加AGE-BSA组作用48 h较AGE-BSA组细胞RAGE mRNA也有明显下降(P＜0.05).结论:AGEs可能部分通过诱导细胞内ROS,促进肾小球系膜细胞表达CTGF,从而引起肾小球系膜基质增生,最终导致肾小球硬化,而中药复方可能通过调节AGEs-RAGE介导的氧化应激过程,从而阻止肾小球纤维化的发展进程.